小鼠脱氢表雄酮(DHEA)ELISA试剂盒说明书

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ELISA 实验注意事项   　　 1. 　正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血清、兔血清或 BSA 等封闭。   　　 2. 　在 ELISA 中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括 :   　　 (1) 　固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是 40 孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。   　　（ 2)  包被抗体 ( 或抗原 ) 的选择：将抗体 ( 或抗原 ) 吸附在固相载体表面时，要求纯度要好 , 吸附时一般要求 PH 在 9.0 ～ 9.6 之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响 , 一般多采用 4 ℃ 18 ～ 24 小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度 (0.1 、 1.0 和 10 μ g ／ ml 等 ) 进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的 OD 值。选择 OD 值 zui大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为 1 ～ 10 μ g ／ ml 。   　　 (3) 　酶标记抗体工作浓度的选择：首先用直接 ELISA 法进行初步效价的滴定 ( 见酶标记抗体部份 ) 。然后再固定其它条件或采取 “ 方阵法 ” ( 包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度 ) 在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。   　　 (4) 　酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体 ( 如 OPD 等 ) 有潜在的致癌作用，应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如 TMB 和 ABTS 是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以 10-30 分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制，尤其是 H2O2 在临用前加入。