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elisa试剂盒的操作需要引起注意的细节

  • 发布日期:2018/6/19 10:20:49      浏览次数:479
    •   elisa试剂盒的操作需要引起注意的细节
        elisa试剂盒以固相载体吸附技术和免疫酶技术相结合建立的一种检测方法,其操作简便,无需特殊设备,并具有高度的敏感性和准确性,所以受到大家的广泛重视,以致在较短时间内,于国内外均取得了较快的进展。
        elisa试剂盒标准曲线线性不佳的原因:
        1、原因:温育位置避光不好或受到气流干扰。
        解决办法:请确认温育位置既不透光也不透风(如抽屉内)。
        2、原因:操作时间拖太久。
        解决办法:请在方法熟练后再进行操作。
        3、原因:微孔间相互污染。
        解决办法:加样品时,请小心勿溅出微孔外,以免造成其它微孔的污染。
        4、原因:标准品或酶标记物所加入的量不一致。
        解决办法:请使用已校正过的移液枪,并确保其与吸头之间有高度密合性。
        5、原因:添加样品或elisa试剂盒的操作方法不正确。
        解决办法:加样品或elisa试剂盒时,吸头请勿接触微孔。
        6、原因:洗板过程发生问题(如管路堵塞、洗完板后未立刻进行下一步骤)。
        解决办法:请随时监控洗板机洗板过程,洗完后立即进行下一步骤。
        elisa试剂盒操作中应注意以下四个方面:
        1.随着病情的进展或由其他因素影响,某些抗体在机体内的含量发生大幅波动,因此有必要对标本进行预处理,例如对血清标本作适当稀释,或离心分离血脂等。间接法测定中,标本适当稀释还可降低非特异性反应。
        2.加样一般使用加液器,在中一般有4次加样:加标本、加酶结合物、加底物和加终止液。加标本时必须每份标本使用一支移液器吸嘴,以免交叉污染。加酶结合物、底物和终止液时则不需更换吸嘴。
        3.在成批手工检测中,还应注意操作时差的影响。加样及混匀时间的差异,使抗原抗体反应和酶促反应时间不一致,对竞争法及定量检测影响很大,不注意可能会导致elisa试剂盒错误结果或定量不准。
        4.洗涤是elisa试剂盒操作过程中决定实验成败的一个关键步骤。目的是除去未结合的免疫反应物,终止抗原抗体反应,除去标本中与反应无关的成分、游离的酶标物以及反应过程中吸附于固相载体上的非特异性物质。

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