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更新时间:2019-08-22 17:23:29
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ELISA
结果判定常用的几种方法
1)
目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于
(
竞争法则浅于
)
阴性对照;与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。
2)
以样品孔的
OD
值大于阴性对照
OD
值
+2
~
3SD
,作为阳性结果的阈值。
3)
以
P
/
N
值
(
阳性孔
OD
值/阴性孔
OD
值
)
大于或等于
2
.
1
为阳性;
P
/
N
值小于
2
.
1
,但大于
1
.
5
为可疑;
P
/
N
小于
1
.
5
为阴性。
4)
定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。
样本处理及要求:
1.
血清:室温血液自然凝固
10-20
分钟,离心
20
分钟左右(
2000-3000
转
/
分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2.
血浆:应根据标本的要求选择
EDTA
或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合
10-20
分钟后,离心
20
分钟左右(
2000-3000
转
/
分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3.
尿液:用无菌管收集,离心
20
分钟左右(
2000-3000
转
/
分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4.
细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心
20
分钟左右(
2000-3000
转
/
分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用
PBS
(
PH7.2-7.4
)稀释细胞悬液,细胞浓度达到
100
万
/ml
左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心
20
分钟左右(
2000-3000
转
/
分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5.
组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的
PBS
,
PH7.4
。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持
2-8℃
的温度。加入一定量的
PBS
(
PH7.4
),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心
20
分钟左右(
2000-3000
转
/
分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
6.
标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于
-20℃
保存,但应避免反复冻融
.
7.
不能检测含
NaN3
的样品,因
NaN3
抑制辣根过氧化物酶的(
HRP
)活性。