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更新时间:2019-08-22 17:23:29
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ELISA
试验
以灵敏度较高、特异性较好的特点得到了广泛的应用,但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大,如不注意,有可能导致显色不全、花板等结果。在操作过程中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下,以期给实验师带来一些启发,提高试验质量。
下面分析
Elisa
试验操作中可能影响结果的原因,并给出相应的解决办法
1
选择试剂
选择质量优良的检测试剂,严格按照试剂说明书进行操作,操作前将试剂在室温下平衡
30-60
分钟。
2
加样
可能原因:
1
)血清或血浆标本分离不好即进行加样;
2
)手工操作中,加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长
(
特别是室内温度较高时
)
;
3
)加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。解决办法:
1
) 标本为血清:
zui
好
将血液先自然存放
1-2
小时后,再用
3000rmp
离心
15
分钟;标本为血浆:必须使用含抗凝剂的血液标本收集管,采血后必须立即颠倒采血管混合
5-10
次,放置一段时间后,
3000rpm
离心
15
分钟;若在几天内检测,可放在
2-8
℃
冰箱中,若要贮存,则置于
-20
℃
的低温冰箱内。
2)
加样后及时放入孵箱。
3)
加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
4)
如果采用
AT
或其他全自动加样,
zui
好
选择
FAME
或其他后处理仪器加酶试剂。
5)
标本较多时,请分批操作。
3
孵育
可能原因:
1)
孵育时未贴封片或加盖,使标本或稀释液蒸发,吸附于孔壁,难于清洗彻底;
2)
孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗彻底。解决办法:
1)
贴封片或加盖;
2)
按说明步骤严格控制操作时间。
4
洗板
可能原因:
1)
采用手工洗板
,
孔与孔之间液体交叉。
2)
采用半自动洗板机洗板时,洗液量不足,导致洗板不彻底;洗板针堵塞,抽吸不完全;洗板不畅,导致洗板效果差。
3)
反应板过多造成洗板等待时间长。 解决办法:
1)
保证洗液注满各孔,洗板针畅通,洗完板后
zui
好
在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干;
2)
合理安排,或多用几台洗板机。
5
显色
可能原因:
1)
显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂;
2)
加显色剂时溅出孔外造成液体回流。解决办法:
1)
显色剂尽量在临用前配制,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅蓝色的
TMB
显色剂不用;
2)
加样时保持显色剂不外流;
3) A
、
B
液应避免接触金属器械。
6
终止
可能原因如加终止液时产生较多气泡,导致假阳性增加。所以在加终止液时应避免产生气泡。
7
读板
如读板时板底不清洁等。应保证酶标板清洁。
所以在整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸
;
尽可能实现
ELISA
检测标准自动化,有效提高检测质量。在实际操作中,除了选择优良试剂外,必须严格按照操作步骤进行操作,同时作好室内质控、室间质评,以严谨的工作作风检测每一份标本,才能保证检测质量。现在国内已有相当数量的单位拥有全自动酶标仪,这对于实现
ELISA
标准化检测、提高检测质量起到了重要作用。
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