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猪Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNT)ELISA试剂盒说明书

简要描述:

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更新时间:2019-08-22 17:23:29

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ELISA 结果判定常用的几种方法

 

    1) 目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于 ( 竞争法则浅于 ) 阴性对照;与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。

 

    2) 以样品孔的 OD 值大于阴性对照 OD +2 3SD ,作为阳性结果的阈值。

 

    3) P N ( 阳性孔 OD 值/阴性孔 OD ) 大于或等于 2 1 为阳性; P N 值小于 2 1 ,但大于 1 5 为可疑; P N 小于 1 5 为阴性。

 

4) 定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。

 

样本处理及要求:

 

1. 血清:室温血液自然凝固 10-20 分钟,离心 20 分钟左右( 2000-3000 / 分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

 

2. 血浆:应根据标本的要求选择 EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合 10-20 分钟后,离心 20 分钟左右( 2000-3000 / 分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。

 

3. 尿液:用无菌管收集,离心 20 分钟左右( 2000-3000 / 分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

 

4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心 20 分钟左右( 2000-3000 / 分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用 PBS PH7.2-7.4 )稀释细胞悬液,细胞浓度达到 100 /ml 左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右( 2000-3000 / 分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

 

5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的 PBS PH7.4 。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持 2-8℃ 的温度。加入一定量的 PBS PH7.4 ),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右( 2000-3000 / 分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

 

6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于 -20℃ 保存,但应避免反复冻融 .

 

7. 不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的( HRP )活性。

 

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