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山羊肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒说明书

简要描述:

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更新时间:2019-08-22 17:23:29

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     ELISA 试验 以灵敏度较高、特异性较好的特点得到了广泛的应用,但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大,如不注意,有可能导致显色不全、花板等结果。在操作过程中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下,以期给实验师带来一些启发,提高试验质量。        下面分析 Elisa 试验操作中可能影响结果的原因,并给出相应的解决办法

    1 选择试剂 选择质量优良的检测试剂,严格按照试剂说明书进行操作,操作前将试剂在室温下平衡 30-60 分钟。

    2 加样   可能原因: 1 )血清或血浆标本分离不好即进行加样; 2 )手工操作中,加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长 ( 特别是室内温度较高时 ) 3 )加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。解决办法: 1 ) 标本为血清: zui 将血液先自然存放 1-2 小时后,再用 3000rmp 离心 15 分钟;标本为血浆:必须使用含抗凝剂的血液标本收集管,采血后必须立即颠倒采血管混合 5-10 次,放置一段时间后, 3000rpm 离心 15 分钟;若在几天内检测,可放在 2-8 冰箱中,若要贮存,则置于 -20 的低温冰箱内。 2) 加样后及时放入孵箱。 3) 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。 4) 如果采用 AT 或其他全自动加样, zui 选择 FAME 或其他后处理仪器加酶试剂。 5) 标本较多时,请分批操作。

    3   孵育   可能原因: 1) 孵育时未贴封片或加盖,使标本或稀释液蒸发,吸附于孔壁,难于清洗彻底; 2) 孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗彻底。解决办法: 1) 贴封片或加盖; 2) 按说明步骤严格控制操作时间。

    4 洗板   可能原因: 1) 采用手工洗板 , 孔与孔之间液体交叉。 2) 采用半自动洗板机洗板时,洗液量不足,导致洗板不彻底;洗板针堵塞,抽吸不完全;洗板不畅,导致洗板效果差。 3) 反应板过多造成洗板等待时间长。 解决办法: 1) 保证洗液注满各孔,洗板针畅通,洗完板后 zui 在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干; 2) 合理安排,或多用几台洗板机。

    5 显色   可能原因: 1) 显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂; 2) 加显色剂时溅出孔外造成液体回流。解决办法: 1) 显色剂尽量在临用前配制,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅蓝色的 TMB 显色剂不用; 2) 加样时保持显色剂不外流; 3) A B 液应避免接触金属器械。

    6 终止   可能原因如加终止液时产生较多气泡,导致假阳性增加。所以在加终止液时应避免产生气泡。

    7 读板   如读板时板底不清洁等。应保证酶标板清洁。   所以在整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸 ; 尽可能实现 ELISA 检测标准自动化,有效提高检测质量。在实际操作中,除了选择优良试剂外,必须严格按照操作步骤进行操作,同时作好室内质控、室间质评,以严谨的工作作风检测每一份标本,才能保证检测质量。现在国内已有相当数量的单位拥有全自动酶标仪,这对于实现 ELISA 标准化检测、提高检测质量起到了重要作用。

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