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植物维生素C(VC)ELISA试剂盒说明书

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更新时间:2019-08-22 17:23:29

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货号:WTA6377,产品名称:植物维生素C(VC)ELISA试剂盒说明书,英文名称:Plant Human Vitamin C,VC ELISA Kit,品牌:进口原装/国产
注意:本公司所销售 植物维生素C(VC)ELISA试剂盒说明书 ,仅用于科研实验,不可用于食品或者临床,食用药品等等

 

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ELISA 试剂盒的包被条件与封闭

 包被用抗原或抗体的浓度,包被的温度和时间,包被液的 pH 等应根据试验的特点和材料的性质而选定。抗体和蛋白质抗原一般采用 pH9.6 的碳酸盐缓冲液作为稀释液,也有用 pH7.2 的磷酸盐缓冲液及 pH7~8 Tris-HCL 缓冲液作为稀释液的。通常在 ELISA 板孔中加入包被液后,在 4-8 冰箱中放置过夜, 37 中保温 2 小时被认为具有同等的包被效果。包被的最适当浓度随载体和包被物的性质可有很大的变化,每批材料需通过实验与酶结合物的浓度协调选定。一般蛋白质的包被浓度为 100ng/ml-20ug/ml

     封闭 (blocking) 是继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。抗原或抗体包被时所用的浓度较低,吸收后固相载体表面尚有未被占据的空隙,封闭就是让大量不相关的蛋白质充填这些空隙,从而排斥在 ELISA 其后的步骤中干扰物质的再吸附。封闭的手续与包被相类似。最常用的封闭剂是 0.05%-0.5% 的牛血清白蛋白,也有用 10% 的小牛血清或 1% 明胶作为封闭剂的。脱脂奶粉也是一种良好的封闭剂,其最da的特点是价廉,可以高浓度使用( 5% )。高质量的速溶食用低脂奶粉即可直接当作封闭剂使用,但由于奶粉的成份复杂,而且封闭后的载体不易长期保存,因此在试剂盒的制备中较少应用。

封闭是否必要,取决于 ELISA 的模式及具体的实验条件。并非所有的 ELISA 固相均需封闭,封闭不当反而会使阴性本底增高。一般说来,双抗体夹心法,只要酶标记物是高活性的,操作时洗涤彻底,不经封闭也可得到满意的结果。特别是用单抗腹水直接包被时,因其中大量非抗体蛋白在包被时同样也吸附在固相表面,业已起到了类似封闭剂的作用。但在间接法测定中,封闭一般是不可少的(见 2.2.2 )。包被好的 ELISA 板干燥后放入密封袋或锡袋中,在低温可保存数月。 

 

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