四季青胎牛血清是细胞培养中用量大的天然培养基,含有丰富的细胞生长必须的营养成份,常用于动物细胞的体外培养,具有极为重要的功能:
1.提供对维持细胞指数生长的激素,基础培养基中没有或量很少的营养物,以及主要的低分子营养物。
2.起酸碱度缓冲液作用。
3.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。
4.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合,起到解毒作用。
5.提供蛋白酶抑制剂,使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活,保护细胞不受伤害。
6.提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属和其他激素等,能结合或调变它们所结合的物质活力。
四季青胎牛血清操作程序:
1. 弃去液体,甩干,每孔加满稀释后洗涤液,振荡三十秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复五次,拍干。
2. 每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色十五分钟。
3. 取出酶标板,每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
4.测定:以空白孔调零,在450nm波长下测量各孔的吸光度值(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
5.根据胎牛血清的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了的,其实际浓度应该乘以总稀释倍数。
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