兔子Ⅰ型前胶原羧基端肽(PⅠCP)ELISA试剂盒说明书

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ELISA 试剂盒操作注意事项

1.   试剂盒保存在 2-8 ℃ ，使用前室温平衡 20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2.   实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3.   标准品稀释液即可视为阴性对照或者空白；预处理后的样本无需稀释，直接取 10 μ L 加样即可。

4.   严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5.   所有液体组分使用前充分摇匀。

试剂的准备

 20 × 洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按 1 ： 20 稀释，即 1 份的 20 × 洗涤缓冲液加 19 份的蒸馏水。

洗板方法

1.   手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置 1min 后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板 5 次。

2.   自动洗板机：每孔注入洗液 350 μ L ，浸泡 1min ，洗板 5 次。

操作步骤

1.   从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回 4 ℃ 。

2.   设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品 50 μ L ；

3.   待测样本孔先加待测样本 10 μ L ，再加样本稀释液 40 μ L ；

4.   随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（ HRP ）标记的检测抗体 100 μ L ，用封板膜封住反应孔， 37 ℃ 水浴锅或恒温箱温育 60min 。

5.   弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 1min ，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板 5 次（也可用洗板机洗板）。

6.   每孔加入底物 A 、 B 各 50 μ L ， 37 ℃ 避光孵育 15min 。

7.   每孔加入终止液 50 μ L ， 15min 内，在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。

结果判断

  绘制标准曲线：在 Excel 工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应 OD 值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

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