豌豆凝集素(PSA)ELISA试剂盒说明书

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ELISA 结果判定常用的几种方法

    1) 目测定性法：加入底物经酶解和终止反应后，肉眼观察阳性孔颜色明显深于 ( 竞争法则浅于 ) 阴性对照；与阴性对照的颜色接近者，判定为阴性。

    2) 以样品孔的 OD 值大于阴性对照 OD 值 +2 ～ 3SD ，作为阳性结果的阈值。

    3) 以 P ／ N 值 ( 阳性孔 OD 值／阴性孔 OD 值 ) 大于或等于 2 ． 1 为阳性； P ／ N 值小于 2 ． 1 ，但大于 1 ． 5 为可疑； P ／ N 小于 1 ． 5 为阴性。

4) 定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。

样本处理及要求：

1. 血清：室温血液自然凝固 10-20 分钟，离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2. 血浆：应根据标本的要求选择 EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合 10-20 分钟后，离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3. 尿液：用无菌管收集，离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用 PBS （ PH7.2-7.4 ）稀释细胞悬液，细胞浓度达到 100 万 /ml 左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的 PBS ， PH7.4 。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持 2-8℃ 的温度。加入一定量的 PBS （ PH7.4 ），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于 -20℃ 保存，但应避免反复冻融 .

7. 不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（ HRP ）活性。