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双花扁豆凝集素(DBA)ELISA试剂盒说明书

简要描述:

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更新时间:2019-08-22 17:23:29

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ELISA 实验注意事项      1.  正式试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特异性反应,可采用羊血清、兔血清或 BSA 等封闭。      2.  在 ELISA 中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括 :      (1)  固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是 40 孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。     ( 2)  包被抗体 ( 或抗原 ) 的选择:将抗体 ( 或抗原 ) 吸附在固相载体表面时,要求纯度要好 , 吸附时一般要求 PH 9.0 9.6 之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响 , 一般多采用 4 18 24 小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度 (0.1 1.0 10 μ g ml ) 进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的 OD 值。选择 OD zui大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为 1 10 μ g ml      (3)  酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接 ELISA 法进行初步效价的滴定 ( 见酶标记抗体部份 ) 。然后再固定其它条件或采取 方阵法 ( 包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度 ) 在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。      (4)  酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体 ( OPD ) 有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如 TMB ABTS 是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以 10-30 分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是 H2O2 在临用前加入。

 

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