ANNEXIN V-FITC-PI 凋亡检测试剂盒

货号：wts1022 产品名称： ANNEXIN V-FITC-PI 凋亡检测试剂盒，Annexin V是一种磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。
在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧，细胞发生凋亡早期，膜磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。在细胞发生凋亡时，膜磷脂酰丝氨酸外翻的发生早于细胞核的变化，而此阶段Propidium Iodide（PI）不能通过细胞膜。细胞坏死时，虽然也会发生磷脂酰丝氨酸外翻，但此时细胞膜的通透性明显增加，PI等核酸染料进入细胞与细胞核中的核酸结合，发出红色荧光。所以Annexin V-FITC（绿色荧光）常与鉴定细胞死活的核酸染料（如PI）合并使用，来区分凋亡细胞与死亡细胞。此试剂盒主要用于流式细胞仪。
操作步骤:  

 1. 调整待测细胞的浓度为 5×105-1×106个/ml 。 

 2. 取1ml 细胞，1000rpm ，4 ℃离心10 分钟，弃上清。 

 3. 加入 1ml 预冷的PBS ，轻轻震荡使细胞悬浮，1000rpm ，4 ℃离心10 分钟，弃上清（对于贴壁细胞，先用

胰酶消化，再用PBS 洗涤）。 

 4. 重复步骤 3 两次。 

 5. 将细胞重悬于 200μ l Binding Buffer 。 

 6. 加入 10 μ l Annexin V-FITC和10 μ l PI ，轻轻混匀，避光室温反应15 分钟  或4 ℃反应 30 分钟。 

 7. 加入 300 μl Binding Buffer ，在1 小时内用流式细胞仪检测。 

 8. 若用荧光显微镜检测，将细胞混合液离心，取细胞沉淀涂片，再进行观察。  

注意事项:  

  为保证得到理想的实验结果在使用此试剂盒之前请认真阅读该注意事项。  

 1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。  

 2.Annexin V-FITC和Propidium iodide 是光敏物质，在保存与操作时请注意避光。  

 3.Propidium iodide（PI ）能通过皮肤吸收，对眼睛有刺激作用。  

 4.在细胞洗涤的最后一步，请尽量将上清弃净，以免 PBS 残留影响实验结果。  

 5.PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高，建议首先进行 Annexin V-FITC 染色，上机前 5 分钟再加

入PI 染色。 
 

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